工作原理:西方印跡的新方法

問題:生命科學研究的支柱,蛋白質印跡通常用於評估相對蛋白質表達差異,例如當調查細胞信號傳導途徑時。**的量化需要仔細注意程序細節和歸一化。傳統上,western印跡是兩天的過程,具有許多步驟:電泳,轉移,阻斷,初次和二次抗體應用和檢測。優化通常是具有挑戰性的,因為當印跡失敗時,很難確定它是導致抗體結合和檢測的步驟的結果,還是該問題是否是由於抗體本身。

解決方案:一個可以幫助的係統是來自Bio-Rad Laboratories,Inc。的V3 Western Workflow TM,其使用無汙染技術來確認蛋白質分離和轉移如預期進行,隨後的**檢測將產生高質量的western印跡數據。這種新係統將工作流程時間減半,而無汙染技術確保更快,更準確地定量蛋白質表達水平。

V3 Western Workflow將Bio-Rad的TGX Stain- Free™預製凝膠,TransBlot®Turbo™傳輸係統和ChemiDoc™MP成像係統集成為一個集成解決方案。

這樣的係統通過電泳和轉移步驟可以節省大量的時間。例如,TGX無染料凝膠上的運行時間為15分鍾,而傳統迷你凝膠的運行時間為45分鍾。同時,Trans-Blot Turbo在7分鍾內實現了蛋白質轉移,相比之下,傳統油罐方法的轉化時間為1小時或過夜。轉印效率可比。

凝膠中嵌入的無汙染技術通過允許容易的質量控製為蛋白印跡過程增加信心。使用ChemiDoc MP成像係統和TGX無染料凝膠,研究人員可以在一分鍾內可視化電泳後凝膠結果,以確保樣品不會降解。這代表了比傳統的考馬斯凝膠染色方法顯著的進步,其可能需要長達兩個小時來完成,並且不是**印跡相容的。ChemiDoc MP還允許研究人員在印跡檢測前檢查膜,並立即可視化蛋白轉移。凝膠隨後可以重新成像以確定是否有任何蛋白質殘留。

重要的是,無染色成像使總蛋白標準化更準確的定量。總蛋白標準化已顯示比常規管家蛋白更一致,其在某些實驗條件或樣品類型下可變地進行。因此,無汙漬技術可以通過消除管家蛋白檢測所必需的連續探測或剝離和重複步驟來減少四小時western印跡標準化過程

雖然更快的進程通常會以數據質量為代價,像V3 Western Workflow這樣的係統可以提供更快的結果,同時提高這些結果有效的信心。


V3 Western工作流程由五個步驟組成,每個步驟由Bio-Rad的印跡儀器和/或產品係列實現:

1.蛋白分離:Bio-Rad的Criterion™和Mini-PROTEAN®TGX無色™預製凝膠

2.可視化蛋白質:ChemiDoc™MP成像係統

3.轉移蛋白:TransBlot®Turbo™轉移係統

4.驗證傳輸:ChemiDoc MP成像係統

5.驗證蛋白質印跡:ChemiDoc MP成像係統