淺談質粒電泳圖說明



**快的是超螺旋,其次是線性DNA,**慢的是開環DNA; 
其實ag娱乐app提取質粒的時候常見的是兩條帶:超螺旋和開環DNA,但是個人覺得線性的DNA也是存在的,隻是量很少而已,因為質粒如果變成線性的話,其就不能進行正常複製,就會慢慢降解掉。所以提取出來的量就會很少,但是我覺得是存在的。  
用酚、氯仿法從工程菌中提取的質粒一般有三種構像,即超螺旋,線形和開環。(開環質粒是指雙鏈環狀的質粒DNA有部分解鏈,因此電泳速度**慢)三種構像的質粒在瓊脂糖電泳的前後順序是超螺旋>線形>開環,線形的質粒在中間,而開環的質粒在**後。 
 
判斷質粒質粒好壞的一個指標就是超螺旋質粒在所以質粒中的含量。因為用質粒轉染真核細胞時,超螺旋的質粒效率**高,所以要求質粒中超螺旋質粒的含量要在90%以上,這也是對作為核酸疫苗重組質粒的要求。 
 
根據我做實驗的經驗,回答你的問題 
1 從細菌中大量提取的質粒電泳時,不一定均出現三條帶,有時會出現兩條,甚**一條(一般是超螺旋的質粒),這跟上樣量也有些關係。出現不同的結果都是由抽提質粒時的操作手法造成的。如果嚴格按照操作步驟,超螺旋的質粒會較多。 
 
2 酶切將質粒線性化以後,才可以用mark判斷大小。如果有三種構像,可以用中間那條帶與mark比較判斷大小。 
 
3 商品化的質粒我沒有直接跑過電泳。我估計應該大部分是超螺旋構像。  
4 酶切後線性化條帶電泳時所處的位置就指示質粒的大小 
  
**先得搞清楚,你用得內切酶在質粒序列中(包括你克隆的基因)總共有幾個位點?如果2個以上,出現上述結果就比較好解釋了。 可以將酶切前後得質粒一起跑電泳,比較一下,酶切後得四條帶與酶切前兩條帶得大小是否有差異。  
部分酶切也是有可能的,原因是你的質粒量太大,酶沒有作用完。或者是酶活力不夠/酶量太少。  
質粒提取比較好的情況下,**前麵得超螺旋構像較多。假如提取質粒時,加溶液II以後,劇烈地振蕩,你就會發現,在質粒電泳圖中,開環構像比例很高,甚**會超過超螺旋構像的亮度,也就是說這種質粒質量很差。   
1,提質粒**好用kit。現在**內、**外的提質粒kit很多,質量都不錯,價格也不貴。一般提取1-5ml菌體質粒的一次反應,可能就3-5元人民幣,半小時時間,一台普通台式離心機(可以不帶製冷的)。提取的質粒質量很好,一般都是超螺旋的,進行常規的分子生物學反應都沒有問題,且很少RNA和基因組DNA汙染。一句話:省時省事質好。用酚氯仿等抽,常會影響後續的操作。  
2,鑒定質粒的方法。**好是測序。其次是多采用幾組酶進行雙酶切分析,再電泳檢測片斷大小與理論值是否一致。 
僅僅靠電泳質粒判斷大小的方法來檢測誤差太大。一是因為質粒結構不均一,前麵很多tx都提到了。二是質粒太大後,其大小本身就不易從膠上判斷準確。比如一個5kb和5.5kb的質粒其大小是不易從電泳膠上區分的。