RNA電泳操作步驟

RNA電泳
 
試劑:
瓊脂糖(Agarose)、甲醛、甲酰胺、MOPS、EDTA、DEPC水。
 
步驟
一 5 x MOPS-EDTA Buffer的配製(0.1 M MOPS pH7; 5mM EDTA; 10mM NaAc)
1. 稱量20.9g的MOPS,置於1L燒杯中。
2. 加700mL DEPC水溶解。
3. 用2N NaOH調節pH**7.0
4. 在上述溶液中加入10mL的1M的NaAC
5. 溶液中加入10mL的0.5M的EDTA pH=8.0
6. 加DEPC水定容**1L
7. 用0.45um濾膜過濾後避光保存
 
二 RNA樣品處理方法
RNA樣品 X uL
甲醛 3.5 uL
甲酰胺 4.0 uL
5 x MOPS-EDTA Buffer 4uL
6 x Loading Buffer 3.0 uL
DEPC水 Up to 20 uL
 
混合均勻後,70°C加熱5min,迅速冷卻**室溫。(PCR儀操作)
 
三 甲醛變性瓊脂糖凝膠的製備
加1g瓊脂糖到31mL DEPC水中,另加10mL 5 x MOPS-EDTA Buffer煮沸溶解。加入DEPC水定容**41mL。將溶液冷卻**60°C左右,加入9mL 37%甲醛,倒入膠槽中靜置1小時。(膠中加入EB染料)
四 電泳
混勻電泳槽中的1 x MOPS-EDTA Buffer電泳液,加樣,10v/cm條件下電泳約1小時。電泳期間每隔15min混勻電泳槽中的電泳液一次。