操作篇:western blot 之增強敏感性

若目的條帶未出現,或很淡,可試用以下方法增強發光強度:

1.用清水漂洗膜數分鍾,重加發光液進行曝光,可延長曝光時間;

2.將膜在 PBST 或 TTBS 中洗滌 30 min 或更長,期間**少換 2 次液;

3.封閉 40~60 min;

4.一抗雜交,室溫 1 h。37℃ 1 h 會更強,但可能增加非特異條帶;

5.PBST 或 TTBS 洗膜 20 min,期間換 2 次液;

6.二抗雜交,37℃ 1 h;

7.PBST 或 TTBS 洗膜 20 min,期間換 2 次液;

8.發光鑒定;

9.若條帶仍未出現或很淡,可以再用 PBST 或 TTBS 洗滌膜 20 min,期間換 2 次液;

10.三抗雜交,室溫 1 h。37℃ 1 h 會更強,但可能增加非特異條帶。三抗即抗二抗的二抗,比如二抗用羊抗兔,此時三抗可以選擇兔抗羊或鼠抗羊等;

11.PBST 或 TTBS 洗滌膜 20 min,期間換 2 次液;

12.發光鑒定。

注:一抗溶液中加入0.2% 疊氮鈉後,可4℃存放**少 2 周,存放一個月我也用過,沒問題,再長時間還沒試過。