灌膠注意事項及問題解答

一、注意事項
1.  清洗厚薄兩塊玻片:初次使用需要用酒精棉球擦拭幹淨。經常使用用自來水衝洗幹淨後,再用單蒸水衝洗,晾幹。也可用酒精擦拭。

2.  取合適大小,容器將各液體依次加入,在加AP和TEMED前將玻璃片放入casting frame 做成glass plate sandwich,放在水平桌麵上鎖定後,固定在casting stand上,注意垂直放置,壓緊底麵的膠條,以防漏液。
 
二、常見問題及解答
1.  兩快玻璃板之間灌膠,膠為什麽總是不平?
(1)  你的玻璃洗幹淨沒有?應該要洗得非常幹淨!
(2)  過硫酸銨和TEMED的加量不合適,加量相對較多,凝膠凝固過快也會膠不平,**多按照分子克隆加倍。
(3)  加完試劑以後沒有很好的搖勻,導致有些部位的聚合劑濃度過高,聚合相對較快造成膠不平。
(4)  稍微注意手法,均勻加入。
(5)  灌膠後應該用水或者正丁醇壓膠麵或用20%的乙醇封頂(沒有毒性可以除氣泡,使用效果極好)。戰友小新723認為:“**天灌膠後,用乙醇直接壓,待乙醇揮發完畢後,上麵加一層水,第二天電泳用,效果很好。不用正丁醇,乙醇比正丁醇效果要好多了”。
(6)  邊緣膠是不容易聚合完全的,灌完膠後要立即加無水正丁醇覆蓋,濃度越低的膠越不要使用雙蒸水壓頂,另外還可以在壓頂試劑如正丁醇中添加少許AP來增加邊緣膠的凝聚強度
(7)  溫度也是影響膠聚合的重要因素,ag娱乐app有些同學為了讓膠更快的凝固而把膠放到50度的溫箱,由於受熱不均勻,造成膠聚合不均勻。

2.  膠為什麽總是漏?
(1)  每次電泳完後,洗淨玻璃、膠條和其它附件,下次用之前,用75%酒精擦拭玻璃和膠條,能有效防漏,且利於剝膠。
(2)  避免玻璃邊緣(與膠條接觸處)破損很重要,尤其是下麵和膠條接觸的地方。
(3)  **是找一塊很平的桌麵,使兩塊玻璃底麵非常齊就行了。
(4)  膠條一定要幹,跑完電泳後,膠條就放在實驗台上晾著。
(5)  下麵的膠條注意不要老化,如果有裂紋的話用保鮮膜墊在上麵,也可以有效防止漏膠,或者反過來用。
(6)  玻璃在使用過程中容易造成小的缺口,從而導致封條無法完全密封,裝好架子後,在玻璃底邊上抹上一層薄薄的凡士林就好了,兩邊多點(容易從兩邊漏)這樣就不會漏了,就算是用了很久的很多小缺口的玻璃都沒有問題,然後轉移到電泳槽的時候,去掉封條,把底上的凡士林擦幹就OK了(注意,一定要擦幹淨,尤其是少量進入了兩隔玻璃之間空腔的,贏偉凡士林不導電,會影響第2相的效果的。
(7)  你可以在海綿墊下再墊一些紙,使得它與玻璃貼的更緊密。或者在玻璃底部用瓊脂糖封上。
(8)  因為兩塊玻板沒有放的完全對齊,底部不在同一個平麵,所以封條封不嚴,重新對齊後就不漏了。以後每次隻要在水平的桌麵上仔細對齊兩塊玻板,再夾緊。用手感覺一下確定在同一平麵上後,放到灌膠架並壓在封條上,卡緊。注意兩邊均勻用力,一般不會再漏。
(9)  先把兩塊玻片放在夾子上,不要加緊,放到架子上,使兩塊玻片的底部對齊,夾緊兩塊玻片,然後取下再在其下麵墊上墊片,這樣一般就不會漏膠了。但是如果你放了墊片再對齊玻片底部,或者在桌子上對其玻片底部然後放到架子上的話,經常會漏膠

3.  條帶跑得比正常的窄?
(1)可能因為膠凝的不均勻,聚合的不是很好,灌膠的時候盡量混勻。
(2)是不是有窄有寬?可能與你拔梳子的時候有關,拔梳應該迅速,衝洗加樣孔的時候要小心,以免把上樣帶扭曲;膠配好了用槍吹幾下再灌膠,還有就是要等指示劑跑到兩層膠交界成一線時,再調高電壓。
(3)可能是你樣品的問題,如果鹽濃度較高,便會擠壓其它條帶,致使條帶寬窄不一,由於同樣的原因,樣品在凝膠中的速度會很慢,造成條帶走的較慢,好像與你的預想不一致。
(4)常見的原因是:每孔上樣量不均勻,應確保每孔中上樣量一致。
(5)可能是係統的ph出了問題,有可能是你的電極緩衝液,也有可能是凝膠緩衝液,更新緩衝液看看,看是否能成功。