PAGE膠上蛋白質的銀染方法

PAGE膠上蛋白質的銀染方法有數百種,其原理相似,具體步驟各不相同。銀染為蛋白質的非特異性染色,呈“爆炸性”反應模式,用於蛋白定量時準確性差,但其敏感度高、簡便易行,仍被廣泛應用。下麵列舉的這三種方法為常用的雙向電泳凝膠染色法,可與質譜兼容。其中方法1敏感性**高,方法3背景**低、對比度好。

1. Blam silver staining protocol (Modified)

程序 溶液 時間
固定 40%ETOH
10%HAC
1小時
漂洗 30%ETOH 2×20min
致敏 0.02%Na2S2O3 1min
漂洗 H2O 3×20Secs
染色 0.1%AgO3(預冷) 4℃,20mins
漂洗 H2O
H2O(更換盤子)
3×20Secs
1min
顯色 3%Na2CO3
0.05%甲醛
 
漂洗 H2O 20Secs
中止 5%Hac  
漂洗 H2O 3×10min
貯存 1%Hac,4℃  

2. EMBL Silver Staining Protocol

程序 溶液 時間
固定 50%MeOH
5%HAc
20min
漂洗 H2O 2hr或過夜
致敏 0.02%Na2S2O3 1min
漂洗 H2O 2×1min
染色 0.1%AgO3(預冷) 20mins
漂洗 H2O 2×1min
顯色 2%Na2CO3
0.04%甲醛
 
中止 5%Hac  
漂洗 H2O 3×10min
貯存 1%Hac,4℃  

3. Vorum Silver Staining Protocol

程序 溶液 時間
固定 50%MeOH
12%HAC
0.05%甲醛
2hr或過夜
漂洗 35%ETOH 3×20min
致敏 0.02%Na2S2O3 2min
漂洗 H2O 3×5mins
染色 0.2AgNO3
0.076%甲醛
20mins
漂洗 H2O 3×5mins
顯色 3%Na2CO3
0.05%甲醛
0.0004% Na2S2O3
 5mins
中止 50%MeOH
12%HAc
 
貯存 1%Hac,4℃  

 注意事項:

1.應嚴格按照操作步驟進行;

2.顯色前**好更換新染色盤;

3.顯色時變為黃色或棕色後立即棄去,更換新鮮顯色液,一般來說染一塊膠應配製500ml染液。更換2-3次;

4.市售甲醛的濃度為37%;

5.三種方法均與質譜兼容,Blum法敏感性高,但背景呈淡黃色,EMBL法次之但背景較低,染色點較黑。Vorum相對不敏感,但背景清晰,信噪比高。