Bcl-2原癌基因的檢測

Bcl-2原癌基因被認為是哺乳動物細胞凋亡過程中的負調控劑。本法采用鼠抗Bcl-2單克隆抗體,可通過**組化或**細胞化學的方法用於檢測組織或細胞中的Bcl-2,或者通過Western blots檢測細胞粗提物。

樣本來源

1. 離心細胞;

2. 細胞塗片、冰凍或石蠟包埋組織切片;

3. 細胞粗提物。

材料與試劑

1. 鼠抗Bcl-2單克隆抗體;

2. 堿性磷酸酶-抗堿性磷酸酶(APAAP);

3. PBS緩衝液

操作步驟

1. 標本固定:用丙酮或甲醇將標本(冰凍組織切片或新鮮組織塗片)固定於玻片上,-20℃,10分鍾;

2. 抗Bcl-2抗體(1:40~1:80)室溫孵育1小時;

3. PBS洗三次;

4. 用抗鼠抗體(橋聯抗體)室溫孵育1小時;

5. PBS洗三次;

6. 在APAAP溶液中孵育,室溫30分鍾;

7. PBS洗三次;

8. 加入Fast Red 底物直到出現明顯的紅色;

9. 以蘇木素複染、封片、觀察結果;

結果判斷

Bcl-2蛋白顯紅色。

注意事項

Western blot方法中抗Bcl-2抗體與26KD的Bcl-2原癌基因產物結合。在離心細胞、細胞塗片、冰凍組織切片,抗體可與Bcl-2蛋白中的41-54位氨基酸結合。在常規固定的石蠟包埋組織切片中,由於抗原表位被封閉,因此抗體僅與較少量細胞反應。