以PVDF膜為固相載體的半幹轉印法

【材料與試劑】

(1)         轉印緩衝液

    Tris堿        48mmol/L             5.8g

    甘氨酸        39mmol/L             2.9g

    SDS           0.037% (w/v)          0.37g

    甲醇           20%                  200ml

    蒸餾水                         加**1000ml

(2)甲醇

(3)6張吸水紙(Whtaman 3 MM或類似物)和1張PVDF膜

(4)電轉移裝置

【操作步驟】

(1)用蒸餾水淋洗裝置的平板電極;

(2)將凝膠切成適當大小用於轉印。除去無關的凝膠和未使用的泳道。作好凝膠標記以確定**條泳道的方向。在準備濾紙時,將凝膠放入轉印緩衝液中;

(3)剪取6張吸水紙(Whtaman 3 MM或替代物)和1張PVDF膜,使其稍大於凝膠,將PVDF膜浸泡在甲醇溶液中5分鍾,操作時要戴手套。油汙或其它蛋白質可阻礙蛋白質與PVDF膜結合。濾紙剪成適當大小。如果濾紙與凝膠的邊緣重疊,電流將短路而繞過凝膠,使轉印不能有效進行。一個可行的辦法是以封口膜作為墊子繞在凝膠的周圍將其與濾紙分開或膜的麵積稍大於凝膠,使凝膠通過膜與濾紙分開;

(4)將吸水紙放入轉印緩衝液中浸濕;

(5)將凝膠、PVDF膜和濾紙放在平板裝置的底部,放置順序如下:

-底部平板陽極

a.三層轉印緩衝液浸濕的吸水紙

b.一張轉印緩衝液浸濕的PVDF膜

c.用轉印緩衝液稍微濕潤的聚丙烯酰胺凝膠

d.三層轉印緩衝液浸濕的吸水紙

-陰極

(6)仔細檢查有無氣泡,並用戴有手套的手或玻棒驅趕氣泡,吸幹凝膠-濾紙夾層組合旁邊的緩衝液。許多裝置在凝膠-濾紙夾層組合旁邊有一個墊圈以防轉印時發生短路;

(7)小心將電極插入裝置頂部。接通電極(正極或紅色表示陽極)並進行轉印。以0.8mA/cm2 凝膠,轉印45min**1.5h。轉印時間不宜太長,否則易引起幹膠;

(8)轉印結束後立即斷開電源,小心拆開裝置,將膜做上標記。電極用後要用蒸餾水清洗。