Western Blot 實驗試劑選購指南

(一)蛋白質電泳

1.請參照常規電泳操作.

2.分子量標準:

可選擇普通分子量標準或預染的分子量標準.在選擇預染的分子量標準時,要注意其優點和缺點:

優點: 在電泳過程中可監控蛋白質分離狀態; 可指示轉印中蛋白質的轉印效率.

缺點: 染料影響蛋白質移動速度;分子量測定略欠**;影響蛋白質與膜的結合力.

購買信息:

中範圍蛋白質分子量標準(14.3-97.4KD)
V5235S
200μg
**產
80元
分子量大小:(14.3、21.5、31、40、42.7、55、66.2、97.4KD)
中範圍蛋白質分子量標準(24-97KD)
MTB087-1
20次
**產
80元
分子量大小:(24、36、53、66、97KD)
低範圍蛋白質分子量標準(6.5-66KD)
M3913-1
20次
Sigma
280元
低範圍蛋白質分子量標準(6.5-66KD)
M3913-1
5×20次
Sigma
1198元
分子量大小:(6.5、20、24、29、36、45、66KD)
高範圍蛋白質分子量標準(36-205KD)
M3788-1
20次
Sigma
280元
高範圍蛋白質分子量標準(36-205KD)
M3788-1
5×20次
Sigma
1198元
            分子量大小:(36、45、55、66、84、97、116、205KD)
寬範圍蛋白質分子量標準(6.5-205KD)
M4038-1
20次
Sigma
280元
寬範圍蛋白質分子量標準(6.5-205KD)
M4038-1
5×20次
Sigma
1266元
分子量大小:(6.5、14.2、20、24、29、36、45、55、66KD)
預染的低範圍蛋白質分子量標準(18-80KD)
 
20次
自產
320元
預染的低範圍蛋白質分子量標準(18-80KD)
 
50次
自產
680元
分子量大小: 80, 60, 39, 23, 18 kDa
預染的中高範圍蛋白質分子量標準(20-210KD)
 
20次
自產
320元
預染的中高範圍蛋白質分子量標準(20-210KD)
 
50次
自產
680元
分子量大小:210, 140, 106/102, 80, 52, 20 kDa
預染的中高範圍蛋白質分子量標準(18.3-210KD)
26681
48次
Pierce
1214元
(二)蛋白質轉印

a)膜的選擇:主要采用 NC膜和PVDF膜,其比較如下:

 
NC膜
PVDF膜
物理強度
蛋白質結合能力
80-100ug/cm2
100-200ug/cm2
溶劑耐受力
考馬斯亮蘭染色
可以
ECL檢測
稍差
可以
快速**檢測
可以
SDS存在下蛋白質結合
質譜分析
可以
(尼龍膜和NC膜的特點相似,主要用於核酸雜交)

b)膜的大小: 請根據膠的麵積來確定.

c)膜的孔徑: 0.45μm適用一般蛋白質.0.2μm適用小分子蛋白質.

購買信息:

66485
硝酸纖維素膜,0.45um,30cmX3m/卷
美**Gelman
1395元/卷
 
硝酸纖維素膜,0.45um,20cmX20cm
美**Gelman
80元/張
 
硝酸纖維素膜,0.45um,20cmX20cm
**產
30元/張
60207
尼龍膜, 0.45um,30cmX3m/卷
美**Gelman
2310元/卷
 
尼龍膜, 0.45um,20cmX15cm
美**Gelman
90元/張
 
尼龍膜, 0.45um,直徑100mm,50張/盒
**產
260元/盒
66543
PVDF膜, 0.45um,30cmX3m/卷
美**Gelman
1690元/卷
 
PVDF膜, 0.45um, 直徑100mm,50張/盒
**產
260元/盒

(三)蛋白質的顯示(大部分實驗不需要進行此步操作)

蛋白質染色的染料有很多種,各種的特點均不一樣.

 
蛋白質靈敏度
影響**檢測
Ponceau-S Red麗春紅
5ug
快綠Fc
5ug
Sypro Rose
1-2ng
氨基黑10B
1ug
考馬斯亮蘭R-250
500ng
印度墨
100ng
膠體金
4ng
購買信息:
Ponceau-S Red麗春紅
Sigma原裝
10g
182元
快綠Fc
Amresco分裝
25g
258元
氨基黑10B
Sigma分裝
10g
168元
考馬斯亮蘭R-250
Amresco分裝
10g
168元
蛋白銀染試劑盒
自產MTB083-1
10次
188元
SDS-PAGE蛋白快速染色試劑
自產
25次
100元
Western Blot 膜可逆染色劑
自產
100ml
100元
(四)**檢測

有各種不同的**檢測方法.請注意選擇.方法不同,則所需的試劑也不同.如需方便,可選擇完整的試劑盒.

A.封閉膜:

這一步會影響結果的成敗和背景的強度.常用封閉劑為BSA和Tween20.脫脂幹奶粉不適合用於糖蛋白和生物素標記抗體.

購買信息:

牛血清白蛋白組份五BSA
Amresco分裝
25g
280元
Tween 20
Amresco分裝
500ml
150元
Western Blot 膜封閉劑
自產
100ml
100元

B.一抗: 根據目的蛋白質選擇.單抗或多抗均可.注意已變性蛋白質無法檢測,**采用非變性膠電泳.我司有 R&D,Genex,Santa Cruz等公司的原裝抗體或進口分裝抗體.具體請參見**學部分產品----**抗體.

C.標記二抗: 根據一抗的來源選擇二抗.

購買信息: 請參見**學部分試劑---各種標記抗體

D.底物係統: 采用常規底物或化學發光底物.

(1)顯色法: 常用底物為BCIP/NBT或DAB .此法簡單,但靈敏度不高,並難以從膜上去除.

(2)化學發光法: 目前比較常用的方法.靈敏度較高,檢測時可采用X光膠片或CCD成像係統.

不同顯色方法產品比較如下:

 
廠家
靈敏度
方法
SuperSignalâ West Pico 化學發光底物
美**Pierce
皮克級
化學發光法
SuperSignalâ West Dura 持久性化學發光底物 
美**Pierce
低飛克級
化學發光法
SuperSignalâ West Femto 高靈敏度化學發光底物
美**Pierce
飛克級
化學發光法
ECL Kit
Amersham
飛克級
化學發光法
BCIP/NBT  (AP酶)
 
100pg
顯色法
DAB      (HRP酶)
 
100pg
顯色法
推薦產品:

SuperECL Plus Western Blotting 超敏發光液

采用獨特的發光底物係統,是**上**靈敏的ECL Western Blot 化學發光試劑。用於Western Blotting 條帶的熒光發光,檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶HRP 的抗體及其關聯的抗原。由兩種溶液組成,使用前混合。SuperECL Plus 超敏發光液,價格低廉,靈敏度大大高出Amersham 和Santa Cruz 公司同類ECL 產品100 倍以上,也明顯高出Pierce 的SuperSignal West Pico 化學發光係統數倍,但背景更幹淨,發光時間持久,可以長達10 小時以上。

特別適用於豐度極低而一般ECL 係統難於檢測的目的蛋白。
 

特點如下:

ж 靈敏度極高,可檢測10-100 fg 抗原。

ж 高信噪比,背境幹淨。

ж 發光迅速。

ж 發光持續12小時以上。

ж 可在日光燈下進行發光操作。

ж 節省抗體(一抗1:2000-1:6000;二抗1:4000-1:10000)。

ж 儲存條件:4℃避光儲存一年,偶爾室溫放置數周不影響質量。

購買信息

產品名稱
規格
編號
價格
SuperECL Plus Western Blotting 超敏發光液
10ml
P1010-10
138
25ml
P1010-25
266
100ml
P1010-100
880

美**Pierce公司化 學 發 光 底 物 係 列

SuperSignalâ 底物家族提供一係列的底物,適合**印跡的多種靈敏度要求。
 
SuperSignalâ West Pico化學發光底物
SuperSignalâ West Dura 持久性化學發光底物
SuperSignalâ West Femto Maximum Sensitivity Substrate
更低檢測極限(克)
10-12
10-14
10-15
建議抗體稀釋度
一抗:1/1,000-1/5,000
一抗:1/1,000-1/50,000
一抗:1/5,000-1/100,000
二抗:1/20,000-1/100,000
二抗:1/20,000-1/250,000
二抗:1/100,000-1/500,000
信號持續時間
6-8小時
24小時
8小時
工作溶液穩定性
室溫24小時
室溫24小時
室溫8小時
貯藏液存放時間
室溫1年
室溫1年
室溫6個月或4°C一年
推薦印跡膜
硝化纖維
硝化纖維或PVDF
硝化纖維或PVDF
 
[email protected] West Pico 化學發光底物
特征
優點
經濟:比任何其它化學發光底物產品花費更少。
更長發光時間:強光發射超過一個工作日,獲得你想要曝光次數。
高強度:信號比其它基於發光胺的係統強兩倍。
皮克級靈敏性:高度靈敏性可快速顯色較寬水平範圍內的蛋白質。
優良的穩定性:24小時工作溶液穩定性;在運輸條件環境下**少可穩定1年。
[email protected] West Dura 持久性化學發光底物
特征
優點
24小時發光時間:比任何其它改良的HRP化學發光底物提供的要長10倍;為發表質量的印跡提供更多的曝光
極好的靈敏度:具**的10-15 克級靈敏度
節省抗體:使用Super Signal â West Dura 伸展持續期底物比用其它化學發光底物,抗體稀釋度可高得多。
立即產生強烈信號,易被膠片或化學發光檢測係統檢測
工作濃度**少穩定24小時;試劑盒在運輸條件下可穩定**少一年
[email protected] West Femto **高靈敏度化學發光底物
特征
優點
釋放由化學發光係統產生的**強信號;使膠片或圖象儀係統成像更容易達到可能檢測蛋白質的**低限:10-15 克
經濟:使寶貴的一抗稀釋度可達1/100,000
Lumi-PhosTM West Blotting 化學發光底物
PIERCE 基於堿性磷酸酶檢測係統的化學發光底物,其同時具有兩個特色:高強度信號和較低的背景。

定貨信息

目錄號
產品名稱
包裝
價格
SuperSignalâ West Pico化學發光底物
34080
SuperSignalâ West Pico Chemiluminescent Substrate
500ml
2178
34077
SuperSignalâ West Pico Chemiluminescent Substrate
100ml
647
34079
SuperSignalâ West Pico Chemiluminescent Substrate Trial Kit
50ml
383
SuperSignalâ West Dura持久性化學發光底物
34075
SuperSignal® West Dura Extended Duration Substrate
100ml
3643
37071
SuperSignal® West Dura Extended Duration Substrate Trial Kit
20ml
805
SuperSignalâ West Femto**高靈敏度化學發光底物
34095
SuperSignal® West Femto Maximum Sensitivity Substrate
100ml
3828
34094
SuperSignal® West Femto Maximum Substrate Trial kit
20ml
950

4.Western Blotting檢測試劑盒

ag娱乐app開發了此步**檢測的完整的試劑盒,即HRP標記的二抗檢測係統(含封閉液,洗液,底物,HRP/親和素-二抗),您隻需準備好一抗,並選擇和一抗動物來源相應的試劑盒就可以.對於實驗來說,采用完整的試劑盒可以避免各種試劑的不匹比而帶來的結果不理想.

Western Blotting DAB顯色法檢測試劑盒

試劑盒的內容:

(1)封閉試劑:10g蛋白質幹粉2包。

(2)濃縮抗體稀釋液:20ml×2瓶,為10倍濃縮液。

(3)過氧化物酶標記二抗。1ml。效價1:200―400

(4)DAB濃縮液10ml(×40倍)

購買信息:

Western Blotting DAB顯色kit(大鼠IgG)
SA2023
**產
550元
Western Blotting DAB顯色kit(山羊IgG)
SA2021
**產
550元
Western Blotting DAB顯色kit(兔IgG)
SA2022
**產
550元
Western Blotting DAB顯色kit(小鼠IgG)
SA2020
**產
550元
SuperSignal West Pico His蛋白Western檢測試劑盒
15168
Pierce
3268元
CL-Xposure X 光膠片(5”x7”)    
34090
Pierce
100張
1054元
CL-Xposure X 光膠片(8”x10”)    
34091
Pierce
100張
2121元
柯達X 光膠片(5”x7”)
 
合資
100張
200元