北京六一DYY-6Cag娱乐app使用說明書

用途及適用範圍
本產品與ag娱乐app組成等電聚焦電泳分析裝置。等電聚焦是利用載體兩性電解質在外加電場的作用下,形成穩定的 PH 梯度,使得蛋白質,酶及多肽按其各自不同的等電點聚焦在相應的 PH 位置上,達到分離的手段。薄層等電聚焦分析電泳可以在一塊薄層膠片上分析多個樣品。
主要結構
主要由上蓋、電級架、冷卻板、製膠隔條、電泳導線等組成。
規格與性能
1、凝膠板尺寸: 215mmχ90mmχ0.4mm。
2、電極采用耐電解腐蝕、耐高溫、純度≥99.95%的貴金屬、製造,具有良好的導電性能,並且便於清洗、維修和更換。
3、正常工作條件為:環境溫度 0℃~40℃;相對濕度≤80%;周圍無強烈振動;實驗台應平整。
4、電泳槽可連續工作時間≥24h。
5、允許使用外接電源**大電壓為 1600V。
6、外型尺寸(L×W×H)335mm×150mm×75mm。
7、重量 2200g。
使用說明
電泳前,禁止將電泳槽附帶電源導線連接到ag娱乐app電源上。
製膠:
1、置凝膠溶液。
2、架製膠室。在一塊玻璃的兩邊各放一根製膠隔條,(或製膠方框)然後把另一塊玻璃放在上麵,用夾子夾好兩塊玻璃板便製成了一個膠室。下端不需要密封。
3、灌膠。將膠室平放在平台上,把配好的凝膠溶液吸入一隻注射器中,直接灌入製好的膠室中。注意灌膠時膠室要從玻璃板的一側逐漸灌入,同時用手指彈擊膠室,以避免在灌入的凝膠溶液中產生氣泡。灌入的膠液在液體的張力作用下是不會泄漏的。這樣灌滿凝膠溶液的膠室在室溫條件下放置 2 小時,溶液即凝固成膠了。
 
4、保存。如果當天就要進行電泳,凝固的薄層膠片需在 4℃冰箱中放置 1 小時,然後取出使用。如果不是當天使用,則可以把凝固的薄層膠片放入一個低溫的濕室環境內保存。用
普通的大號培養皿,按其大小剪好兩張圓形濾紙片,滴上少許蒸餾水使之浸濕,貼在皿內的上下表麵,即成為一個簡易的濕室。這樣把薄層膠片放入其中,保存在 4℃冰箱內,可
供數周之內使用。
樣品的預處理
樣品的高鹽濃度影響載體兩性電解質 PH 梯度的形成,從而導致區帶的歪斜,對這樣的樣品需要事先透析除鹽。樣品的低鹽濃度不利於蛋白質溶解,常用 1%甘氨酸或載體兩性電解質為溶劑溶解這樣的蛋白質樣品。某些蛋白質在其等電點附近沉澱,可以在凝膠中加入尿素,無離子或兩性離子去垢劑來助溶。此外,樣品應預先去除顆粒,以免它們停留在加樣處,造成拖尾現象。
樣品的施加
揭開部分膠框,用兩個小鋼鏟,旋轉另一個小鋼鏟,揭去上層的玻璃板。注意要小心的操作,避免薄層膠片脫離下層的玻璃板。
樣品直接加在薄層膠片上有許多種方式。一般是用一疊 8 層的擦鏡紙,剪成 0.4×0.5cm的小方塊,先貼在膠片上,再用微量注射器滴加一定量的樣品;亦可以把小塊直接浸入樣品溶液中,再貼在膠片上,這樣的加樣量大約為 10μl。加樣量一般按所分析樣品中蛋白質的類型和數目而定。用考馬斯亮藍染色,一般可加蛋白質 1—10μg;用酶活性染色,可依所顯示的酶的區帶的深淺程度來調整酶樣品的濃度。
電極液的施加
電極液采用 1MHaPO4 為陽極液,1MNaOH 為陰極液,以適應 PH3.5-10.0 範圍的載體兩性電解質形成相應的 PH 梯度。
用 3 片為一疊的.5mm 寬的 whatmanl#濾紙條來浸濕電極液,然後分正負極,貼加在薄層膠片的兩端。電極濾紙條要貼加得平行,以便使鉑金絲電極正好壓在它們的上麵。
電泳的條件
把載有加好了樣品和電極濾紙條的薄層膠片放在電極架的下架上,蓋好上架,使得電極絲和電極濾紙條充分接觸,成為一體,接通正負電極,即可開始電泳。
這樣簡單的薄層等電聚焦電泳在 4℃冰箱中進行,如需要也可在室溫下通冷卻水電泳。
一般所給的條件是:起始電壓為 60V,15 分鍾調** 120V,轉而恒流,每厘米膠片長度 0.8—1.0mA,約 1 小時左右,電壓便上升到 600—700V,維持 3—3.5 小時即可結束電泳。
PH 梯度的測定
把 1 ×7cm的薄層切下來,從正極端到負極端切分為 14 等份,每份加 0.4ml 重蒸水,攪碎後用微量電極在一般的酸度計上測定它們的 PH 值,依此數據描繪出 PH 曲線。
染色及保存
蛋白質染色步驟如下:1、5%磺基水楊酸+10%三氯醋酸(W/V)固定 1 小時;2、過脫色液 35%無水乙醇+10%冰醋酸(W/V)45 分鍾;3、染色液 0.2%考馬斯亮藍 R250
的脫色液溶液(W/V)染色 30 分鍾;4、置脫色液(同 2)中,37℃溫箱內過夜。
小肽染色步驟如下:1、10%三氯醋酸固定過夜;2、染色液染色三小時,染色液的配製是 50ml 考馬斯亮藍 G250 加 50ml21mol/LH2SO4,不斷搖動 3 小時,過濾,取 9ml 濾液
加 1ml10mol/LKOH,然後加 1.36ml100%三氯醋酸。3、用蒸餾水漂洗背景。
活性染色依特異的組織化學方法進行。
染色後的膠片可放在 20%甘油中或放在溫室的環境中,在冰箱中保存,也可製成幹片。
等電點的測定
測量染色後所分離的區帶距正極端的長度,按 PH 曲線找出其響應的等電點來。
 
日常維護與保養
包裝後的產品貯存環境溫度應在- 40℃~55℃、相對濕度不超過 93%、無腐蝕性氣體和通風良好的室內,時間 15 周以內。
平時注意保持電泳槽清潔。使用後要徹底清洗,可用海綿沾少許洗衣粉、洗滌劑清洗,再用無離子水衝洗幹淨,放在無灰塵處晾幹備用。
關於與本品配套使用的ag娱乐app
我廠生產的ag娱乐app電源規格型號較多,常規型號均可滿足本產品的配套。除 DYY-1CDYY-7C 型外均可使用。
ag娱乐app的使用**嚴格按其使用說明書操作。
本產品工作時應與ag娱乐app分開一定距離,嚴禁放在ag娱乐app上使用。
注意事項
本產品主體及部分配件均為易碎品,包裝、運輸、使用中均應謹防——高處跌落、碰撞;槽體內安裝的鉑絲電極易斷裂,使用中應小心操作。