蛋白質凝膠電泳及染色方法的幾點改進

蛋白質凝膠電泳及染色方法的幾點改進
SDS - PAGE及染色技術在蛋白質的分析中, 具有設備簡單, 操作方便, 所需樣品量少( 1 ~100μg) , 分辨率較高等優點, 在分析或研究中應用範圍廣泛1可用於蛋白質、酶、核酸等生物分子的分離、定性、定量及少量的製備, 還可用於測定分子量、等電點等〔1 - 2〕1該方法主要依據SDS - 聚丙烯酰胺凝膠體係中, 使蛋白質樣品與SDS結合形成帶負電荷的複合物, 由於複合物的分子量不同,在電泳中反映出不同的遷移率, 根據標準蛋白質樣品在該係統電泳中所作出的標準曲線, 就可以推算出被測蛋白質樣品的相對分子量1在聚丙烯酰胺凝膠係統中, 蛋白質分子的電泳遷移率主要取決於它的分子量大小, 而其他因素對電泳遷移率的影響可以忽略不計〔3 - 5〕1因此, 快速有效地利用SDS -PAGE及染色技術進行相關**域研究是十分有必要的
1 材料與方法
111 試劑和主要儀器
SDS、Tris - base、標準分子量蛋白質均購自北京鼎**生物有限公司, 丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺購自華美生物工程公司, 5804R高速冷凍離心機購自Eppendorf公司產品, 紫外分光光度計購自日本島津, 24D垂直電泳槽北京六一公司產品
112方法
11211凝膠電泳溶液的配製
凝膠溶液、樣品處理液、電泳緩衝液及考馬斯亮藍染色液均按文獻〔6〕方法配製及存儲; 銀染液的配製、保存均按文獻〔7〕方法1
11212 不同濃度凝膠分離標準分子量蛋白質
采用垂直、不連續SDS - PAGE對標準蛋白質樣品和牛血清白蛋白組分五進行分析1凝膠濃度分別為: 濃縮膠濃度為315% , 分離膠濃度分別為8%、10%、12%和15%1將標準蛋白質樣品、牛血清白蛋白組分五分別與樣品緩衝液等體積混合後沸水浴3 - 5min, 上樣1置於ag娱乐app, 恒流40mA電泳分離各種蛋白質樣品1電泳完畢後固定凝膠, 並用銀染或考馬斯亮蘭染色和顯色1標準蛋白質樣品含有分子量分別為615、1615、2510、3215、4715、6210、8310、17510kD的成分, 作為小、中、大分子量的標準蛋白質, 用牛血清白蛋白組分五(BSA分子量: 6612kD) 與標準蛋白質分別在8%、10%、12%和15%的凝膠中進行電泳, 以進行凝膠濃度選擇實驗1\
11213 蛋白質凝膠電泳的染色
分離膠用去離子水衝洗幹淨, 置於含有凝膠體積10倍左右固定液的培養皿中, 室溫放置於脫色搖床, 固定4 - 12h1分別采用考馬斯亮藍染和銀染, 進行蛋白質凝膠電泳結果分析